راهنمای جامع نگهداری کشت باکتری، شامل تکنیک‌های ضروری، عیب‌یابی و بهترین شیوه‌ها برای پژوهشگران در سراسر جهان.
تسلط بر نگهداری کشت باکتری: یک راهنمای جهانی
کشت‌های باکتریایی سنگ بنای کاربردهای بی‌شمار تحقیقاتی و صنعتی هستند، از تولید آنتی‌بیوتیک‌های جدید گرفته تا درک فرآیندهای بنیادین بیولوژیکی. نگهداری صحیح این کشت‌ها برای اطمینان از نتایج قابل اعتماد، جلوگیری از آلودگی و حفظ سویه‌های ارزشمند برای استفاده در آینده، حیاتی است. این راهنمای جامع، مروری دقیق بر بهترین شیوه‌ها برای نگهداری کشت باکتری، متناسب با نیاز پژوهشگران و متخصصان در سراسر جهان ارائه می‌دهد.
چرا نگهداری کشت مهم است؟
نگهداری مؤثر کشت فراتر از زنده نگه داشتن باکتری‌هاست. این امر شامل حفظ ویژگی‌های مطلوب سویه، اطمینان از خلوص آن و جلوگیری از تجمع جهش‌های ژنتیکی است. کشت‌هایی که به درستی نگهداری نشوند می‌توانند منجر به موارد زیر شوند:
- نتایج غیردقیق آزمایشگاهی: تغییرات در ساختار ژنتیکی کشت یا آلودگی می‌تواند نتایج آزمایش را منحرف کند.
- از دست دادن سویه‌های ارزشمند: بی‌توجهی به نگهداری می‌تواند منجر به مرگ یا تغییرات غیرقابل بازگشت در استوک‌های مهم باکتریایی شود.
- افزایش هزینه‌ها: آلودگی مستلزم سفارش مجدد سویه‌ها و تکرار آزمایش‌ها است که منجر به بارهای مالی قابل توجهی می‌شود.
- به خطر افتادن اعتبار تحقیق: استفاده از کشت‌های با ویژگی‌های نامشخص یا آلوده می‌تواند به اعتبار یافته‌های پژوهشی آسیب برساند.
تکنیک‌های ضروری برای نگهداری کشت باکتری
چندین تکنیک برای نگهداری کشت‌های باکتریایی سالم و قابل اعتماد ضروری هستند. این تکنیک‌ها شامل کشت خطی، رقت‌سازی سریالی، پاساژ دادن (کشت مجدد) و سرماداری (انجماد عمیق) است. ما هر یک را به تفصیل بررسی خواهیم کرد.
۱. کشت خطی برای جداسازی و خلوص‌سنجی
کشت خطی یک تکنیک بنیادین برای جداسازی کلنی‌های منفرد باکتری از یک کشت مخلوط یا اطمینان از خلوص یک کشت موجود است. این روش شامل رقیق کردن یک نمونه باکتریایی بر روی سطح یک پلیت آگار برای به دست آوردن کلنی‌های کاملاً جدا شده است.
روش کار:
- استریل کردن لوپ: یک لوپ کشت استریل را تا زمانی که قرمز شود، شعله‌دهی کنید. قبل از استفاده اجازه دهید کاملاً خنک شود.
- برداشتن نمونه: لوپ را به آرامی با کشت باکتریایی تماس دهید.
- کشت در ربع اول: لوپ را به آرامی در یک ناحیه کوچک از پلیت آگار (ربع ۱) بکشید.
- شعله‌دهی و خنک کردن لوپ: لوپ را دوباره شعله‌دهی کرده و اجازه دهید خنک شود.
- کشت در ربع دوم: لوپ را از ناحیه کشت داده شده قبلی (ربع ۱) عبور داده و در یک ناحیه جدید از پلیت (ربع ۲) بکشید.
- تکرار برای ربع‌های ۳ و ۴: لوپ را شعله‌دهی و خنک کنید، سپس این فرآیند را برای ربع‌های ۳ و ۴ تکرار کنید، و هر بار لوپ را از ناحیه کشت داده شده قبلی عبور دهید.
- انکوباسیون: پلیت را در دمای مناسب برای گونه باکتریایی مورد کشت، انکوبه کنید.
نتایج مورد انتظار: کلنی‌های کاملاً جدا شده باید در ربع‌های بعدی (معمولاً ۳ و ۴) ظاهر شوند. یک کلنی منفرد و کاملاً جدا شده را برای کشت یا نگهداری بیشتر انتخاب کنید.
تفاوت‌های جهانی: دسترسی به پلیت‌های آگار از پیش ریخته‌شده می‌تواند در آزمایشگاه‌های مختلف در سطح جهان متفاوت باشد. اگرچه این پلیت‌ها راحت هستند، اما ممکن است گران‌تر باشند. بسیاری از آزمایشگاه‌ها، به ویژه در کشورهای در حال توسعه، برای کاهش هزینه‌ها، پلیت‌های آگار خود را از محیط کشت دهیدراته تهیه می‌کنند.
۲. رقت‌سازی سریالی برای شمارش دقیق
رقت‌سازی سریالی برای کاهش غلظت باکتری‌ها در یک نمونه استفاده می‌شود و امکان شمارش دقیق واحدهای تشکیل‌دهنده کلنی (CFU) در هر میلی‌لیتر را فراهم می‌کند. این تکنیک برای میکروبیولوژی کمی و تعیین زنده‌مانی یک کشت ضروری است.
روش کار:
- آماده‌سازی محلول‌های رقیق‌کننده: یک سری لوله یا بطری استریل حاوی حجم مشخصی از رقیق‌کننده استریل (مانند سالین بافر فسفات، محلول سالین) آماده کنید. رقت‌های رایج ۱:۱۰ (۱۰-۱)، ۱:۱۰۰ (۱۰-۲)، ۱:۱۰۰۰ (۱۰-۳) و غیره هستند.
- انجام رقت‌سازی سریالی: حجم مشخصی از کشت باکتریایی را به اولین محلول رقیق‌کننده منتقل کنید. به خوبی مخلوط کنید.
- تکرار رقت‌سازی: همان حجم را از اولین محلول رقیق‌کننده به بعدی منتقل کرده و هر بار به خوبی مخلوط کنید. این فرآیند را برای تمام محلول‌های رقیق‌کننده تکرار کنید.
- کشت رقت‌ها: حجم مشخصی (مثلاً ۰.۱ میلی‌لیتر یا ۱ میلی‌لیتر) از هر رقت را روی پلیت‌های آگار کشت دهید. مایه تلقیح را به طور یکنواخت در سطح آگار پخش کنید.
- انکوباسیون: پلیت‌ها را در دمای مناسب برای گونه باکتریایی انکوبه کنید.
- شمارش کلنی‌ها: تعداد کلنی‌ها را در پلیت‌هایی که بین ۳۰ تا ۳۰۰ کلنی دارند، بشمارید. CFU/mL را با استفاده از فرمول زیر محاسبه کنید:
CFU/mL = (تعداد کلنی‌ها) / (حجم کشت داده شده به میلی‌لیتر) × (فاکتور رقت)
مثال: اگر شما ۰.۱ میلی‌لیتر از رقت ۱۰-۶ را کشت داده و ۱۵۰ کلنی شمارش کنید، CFU/mL برابر خواهد بود با: (۱۵۰ / ۰.۱) × ۱۰۶ = ۱.۵ × ۱۰۹ CFU/mL
تفاوت‌های جهانی: نوع رقیق‌کننده مورد استفاده می‌تواند بر اساس دسترسی محلی و ترجیحات آزمایشگاه متفاوت باشد. سالین بافر فسفات (PBS) به طور گسترده استفاده می‌شود، اما محلول سالین یا حتی آب مقطر استریل نیز می‌توانند جایگزین‌های مناسبی باشند.
۳. پاساژ دادن برای حفظ زنده‌مانی
پاساژ دادن شامل انتقال باکتری‌ها از یک کشت موجود به یک محیط رشد تازه است. این فرآیند مواد مغذی تازه را برای باکتری‌ها فراهم کرده و از تجمع مواد زائد سمی جلوگیری می‌کند و در نتیجه زنده‌مانی و قدرت کشت را حفظ می‌کند. فرکانس پاساژ دادن به گونه باکتریایی و شرایط نگهداری بستگی دارد.
روش کار:
- آماده‌سازی محیط تازه: یک محیط رشد استریل (مانند پلیت آگار یا براث) آماده کنید.
- استریل کردن لوپ: یک لوپ کشت استریل را شعله‌دهی و خنک کنید.
- انتقال باکتری: لوپ را به آرامی با کشت باکتریایی تماس داده و مقدار کمی از باکتری را به محیط تازه منتقل کنید.
- کشت خطی یا تلقیح: اگر از پلیت آگار استفاده می‌کنید، باکتری را برای جداسازی کشت خطی دهید. اگر از براث استفاده می‌کنید، با چرخاندن لوپ، براث را تلقیح کنید.
- انکوباسیون: کشت را در دمای مناسب انکوبه کنید.
فرکانس: برای کشت‌های در حال رشد فعال، معمولاً پاساژ دادن هر ۱-۲ هفته توصیه می‌شود. با این حال، برخی از ارگانیسم‌های سخت‌رشد ممکن است به پاساژ دادن مکررتری نیاز داشته باشند. بر اساس نیازهای خاص کشت‌های خود، یک برنامه زمان‌بندی ایجاد کنید.
تفاوت‌های جهانی: نوع محیط کشت مورد استفاده برای پاساژ دادن به شدت به گونه باکتریایی خاص بستگی دارد. محیط‌های استاندارد مانند LB (Lysogeny Broth) و نوترینت آگار به طور گسترده استفاده می‌شوند، اما ممکن است برای برخی ارگانیسم‌ها به محیط‌های تخصصی نیاز باشد. تأمین محیط‌های تخصصی می‌تواند در برخی مناطق یک چالش باشد که منجر به تفاوت در پروتکل‌های کشت می‌شود.
۴. سرماداری (Cryopreservation) برای نگهداری طولانی‌مدت
سرماداری شامل انجماد کشت‌های باکتریایی در دماهای بسیار پایین (معمولاً ۸۰- درجه سانتی‌گراد یا در نیتروژن مایع) برای حفظ آنها برای دوره‌های طولانی است. این روش فعالیت متابولیکی را متوقف کرده، از رانش ژنتیکی جلوگیری می‌کند و ویژگی‌های کشت را حفظ می‌کند. سرماداری استاندارد طلایی برای نگهداری طولانی‌مدت سویه‌های باکتریایی است.
روش کار:
- آماده‌سازی عامل محافظ انجماد: یک محلول محافظ انجماد مانند گلیسرول یا دی‌متیل سولفوکسید (DMSO) با غلظت ۱۰-۲۰٪ در یک محیط رشد مناسب آماده کنید. گلیسرول به دلیل سمیت کمتر معمولاً ترجیح داده می‌شود.
- برداشت باکتری: باکتری‌ها را از یک کشت تازه و در حال رشد فعال برداشت کنید.
- مخلوط کردن با عامل محافظ انجماد: کشت باکتریایی را با محلول محافظ انجماد در یک کرایوویال استریل مخلوط کنید. غلظت نهایی عامل محافظ انجماد باید ۱۰-۲۰٪ باشد.
- انجماد تدریجی: کرایوویال‌ها را به تدریج منجمد کنید تا تشکیل کریستال‌های یخ که می‌توانند به سلول‌ها آسیب برسانند، به حداقل برسد. یک روش رایج قرار دادن کرایوویال‌ها در یک محفظه انجماد (مانند جعبه استایروفوم) در دمای ۸۰- درجه سانتی‌گراد به مدت یک شب قبل از انتقال آنها به نیتروژن مایع برای نگهداری طولانی‌مدت است. برخی آزمایشگاه‌ها از فریزرهای با نرخ کنترل‌شده برای سرمایش دقیق‌تر استفاده می‌کنند.
- نگهداری در نیتروژن مایع یا فریزر ۸۰- درجه سانتی‌گراد: کرایوویال‌ها را برای نگهداری طولانی‌مدت به نیتروژن مایع (۱۹۶- درجه سانتی‌گراد) یا فریزر ۸۰- درجه سانتی‌گراد منتقل کنید.
احیای کشت‌های منجمد:
- ذوب سریع: کرایوویال را به سرعت در حمام آب ۳۷ درجه سانتی‌گراد ذوب کنید.
- رقیق کردن و کشت: بلافاصله کشت ذوب شده را در یک محیط رشد مناسب رقیق کرده و روی یک پلیت آگار کشت دهید.
- انکوباسیون: پلیت را در دمای مناسب انکوبه کنید.
استوک‌های گلیسرولی: یک مثال عملی
فرض کنید شما یک کشت از Escherichia coli دارید که می‌خواهید آن را حفظ کنید. شما باید:
- E. coli را در محیط براث LB به مدت یک شب رشد دهید.
- ۰.۵ میلی‌لیتر از کشت شبانه را با ۰.۵ میلی‌لیتر گلیسرول استریل ۵۰٪ در یک کرایوویال مخلوط کنید (که منجر به غلظت نهایی گلیسرول ۲۵٪ می‌شود).
- کرایوویال را به مدت یک شب در فریزر ۸۰- درجه سانتی‌گراد قرار دهید، سپس آن را برای نگهداری طولانی‌مدت به نیتروژن مایع منتقل کنید.
تفاوت‌های جهانی: دسترسی به نیتروژن مایع ممکن است در برخی مناطق محدود باشد، که باعث می‌شود فریزرهای ۸۰- درجه سانتی‌گراد گزینه اصلی برای سرماداری باشند. در حالی که نگهداری در دمای ۸۰- درجه سانتی‌گراد ایده‌آل‌تر از نیتروژن مایع نیست، اما در صورت انجام صحیح، همچنان می‌تواند حفظ طولانی‌مدت مؤثری را فراهم کند. کیفیت و نگهداری فریزرهای ۸۰- درجه سانتی‌گراد نیز عوامل حیاتی هستند، زیرا نوسانات دما می‌تواند زنده‌مانی کشت‌های منجمد را به خطر اندازد.
عیب‌یابی مشکلات رایج در نگهداری کشت
علی‌رغم پیروی از بهترین شیوه‌ها، ممکن است مشکلاتی در طول نگهداری کشت به وجود آید. در اینجا برخی از مشکلات رایج و راه‌حل‌های آنها آورده شده است:
۱. آلودگی
آلودگی یک نگرانی بزرگ در کشت باکتری است. این مشکل می‌تواند توسط باکتری‌ها، قارچ‌ها یا سایر میکروارگانیسم‌هایی که به طور ناخواسته وارد کشت می‌شوند، ایجاد شود.
نشانه‌های آلودگی:
- کدورت در کشت‌های براث: کدورت یا رسوب غیرمنتظره در کشت‌های مایع.
- مورفولوژی غیرعادی کلنی: کلنی‌هایی با اشکال، اندازه‌ها یا رنگ‌های متفاوت از حد انتظار.
- رشد قارچی: رشد کرکی یا کپک‌مانند روی پلیت‌های آگار.
- بوی نامطبوع: بوی بد یا غیرعادی که از کشت متصاعد می‌شود.
پیشگیری:
- تکنیک آسپتیک (استریل): پایبندی دقیق به تکنیک آسپتیک بسیار مهم است. این شامل استریل کردن تمام مواد و کار در یک محیط استریل (مانند هود لامینار) است.
- محیط و لوازم استریل: فقط از محیط‌ها، آب و لوازم یکبار مصرف استریل استفاده کنید.
- نظارت منظم: به طور منظم کشت‌ها را برای علائم آلودگی بررسی کنید.
- استریلیزاسیون با فیلتر: محیط‌ها و محلول‌های حساس به حرارت را با فیلتر استریل کنید.
اصلاح:
- دور ریختن کشت‌های آلوده: اگر یک کشت آلوده شد، باید فوراً دور ریخته شود. برای نجات آن تلاش نکنید.
- شناسایی منبع: سعی کنید منبع آلودگی را برای جلوگیری از وقوع مجدد شناسایی کنید.
- ضدعفونی کردن تجهیزات: تمام تجهیزات و سطوحی که ممکن است در معرض آلودگی قرار گرفته باشند را به طور کامل ضدعفونی کنید.
تفاوت‌های جهانی: دسترسی و هزینه هودهای لامینار می‌تواند در مناطق مختلف به طور قابل توجهی متفاوت باشد. در محیط‌های با منابع محدود، پژوهشگران ممکن است نیاز به استفاده از استراتژی‌های جایگزین برای حفظ استریلیته داشته باشند، مانند کار در یک منطقه تمیز مشخص و استفاده از استریلایزر UV قابل حمل.
۲. از دست دادن زنده‌مانی
کشت‌های باکتریایی می‌توانند به دلیل تخلیه مواد مغذی، تجمع مواد زائد سمی یا شرایط نگهداری نامناسب، زنده‌مانی خود را از دست بدهند.
نشانه‌های از دست دادن زنده‌مانی:
- رشد کند: کاهش نرخ رشد در مقایسه با کشت‌های قبلی.
- تشکیل ضعیف کلنی: کلنی‌های کوچک یا با تعریف ضعیف روی پلیت‌های آگار.
- عدم رشد: عدم رشد هنگام پاساژ دادن.
پیشگیری:
- پاساژ دادن منظم: کشت‌ها را به طور منظم پاساژ دهید تا مواد مغذی تازه فراهم شده و مواد زائد حذف شوند.
- شرایط نگهداری مناسب: کشت‌ها را در دما و رطوبت مناسب نگهداری کنید.
- سرماداری: کشت‌ها را برای نگهداری طولانی‌مدت منجمد کنید.
اصلاح:
- بررسی محیط کشت: اطمینان حاصل کنید که محیط رشد هنوز مؤثر است و تاریخ انقضای آن نگذشته است.
- بهینه‌سازی شرایط رشد: شرایط رشد مانند دما، pH و هوادهی را بهینه کنید.
- احیا از استوک‌های منجمد: اگر کشت زنده‌مانی خود را از دست داده است، در صورت وجود آن را از استوک‌های منجمد احیا کنید.
۳. رانش ژنتیکی
رانش ژنتیکی به تجمع جهش‌های ژنتیکی در یک کشت در طول زمان اشاره دارد. این امر می‌تواند ویژگی‌های سویه را تغییر داده و بر نتایج آزمایشگاهی تأثیر بگذارد.
نشانه‌های رانش ژنتیکی:
- تغییرات در فنوتیپ: تغییر در مورفولوژی کلنی، نرخ رشد یا سایر ویژگی‌های قابل مشاهده.
- از دست دادن پلاسمیدها: از دست دادن پلاسمیدهای حاوی ژن‌های مهم.
- تغییرات مقاومت آنتی‌بیوتیکی: تغییر در پروفایل‌های مقاومت به آنتی‌بیوتیک.
پیشگیری:
- به حداقل رساندن پاساژ دادن: تعداد مراحل پاساژ دادن را کاهش دهید تا فرصت تجمع جهش‌ها به حداقل برسد.
- سرماداری: کشت‌ها را در مراحل اولیه منجمد کرده و از آنها به عنوان منبع اصلی برای آزمایش‌ها استفاده کنید.
- مشخصه‌یابی منظم: به طور دوره‌ای ویژگی‌های کشت‌ها را برای نظارت بر تغییرات در خواص آنها بررسی کنید.
اصلاح:
- احیا از استوک‌های اولیه: اگر به رانش ژنتیکی مشکوک هستید، کشت‌ها را از استوک‌های منجمد اولیه احیا کنید.
- جداسازی مجدد سویه: سویه را از یک کلنی منفرد مجدداً جداسازی کنید تا یک جمعیت همگن به دست آورید.
بهترین شیوه‌ها برای یک محیط آزمایشگاهی جهانی
اجرای بهترین شیوه‌ها برای نگهداری کشت سازگار و قابل اعتماد در آزمایشگاه‌های سراسر جهان حیاتی است. این شیوه‌ها هم جنبه‌های فنی و هم عوامل سازمانی را که بر کیفیت کشت تأثیر می‌گذارند، پوشش می‌دهند.
۱. پروتکل‌های استاندارد
پروتکل‌های استاندارد برای تمام رویه‌های نگهداری کشت ایجاد و حفظ کنید. این امر سازگاری و تکرارپذیری را در بین پژوهشگران و آزمایشگاه‌های مختلف تضمین می‌کند. پروتکل‌ها باید شامل دستورالعمل‌های دقیق، لیست مواد مورد نیاز و معیارهای واضح برای ارزیابی کیفیت کشت باشند.
همکاری جهانی: هنگام همکاری با تیم‌های تحقیقاتی بین‌المللی، پروتکل‌ها را به اشتراک گذاشته و مقایسه کنید تا منابع بالقوه تنوع را شناسایی کرده و رویه‌ها را هماهنگ سازید.
۲. اقدامات کنترل کیفیت
اقدامات کنترل کیفیت را برای نظارت بر سلامت و خلوص کشت‌های باکتریایی اجرا کنید. این شامل موارد زیر است:
- رنگ‌آمیزی گرم منظم: رنگ‌آمیزی گرم را برای بررسی خلوص و شناسایی هرگونه ارگانیسم آلوده‌کننده انجام دهید.
- تحلیل منحنی رشد: نرخ رشد کشت‌ها را برای تشخیص هرگونه تغییر در زنده‌مانی یا ویژگی‌های رشد نظارت کنید.
- تست حساسیت آنتی‌بیوتیکی: به طور دوره‌ای حساسیت آنتی‌بیوتیکی کشت‌ها را برای نظارت بر توسعه مقاومت آزمایش کنید.
- تحلیل ژنوتیپی: انجام تحلیل ژنوتیپی (مانند PCR، توالی‌یابی) را برای تأیید هویت سویه و تشخیص هرگونه جهش ژنتیکی در نظر بگیرید.
استانداردهای بین‌المللی: به استانداردهای شناخته شده بین‌المللی برای کنترل کیفیت، مانند استانداردهای تعیین شده توسط مجموعه کشت نوعی آمریکا (ATCC) یا سایر سازمان‌های مرتبط، پایبند باشید.
۳. برچسب‌گذاری و مستندسازی مناسب
سوابق دقیقی از تمام فعالیت‌های نگهداری کشت حفظ کنید. این شامل موارد زیر است:
- شناسایی سویه: تمام کشت‌ها را به وضوح با نام سویه، تاریخ مبدأ، شماره پاساژ و هرگونه اطلاعات مرتبط دیگر برچسب‌گذاری کنید.
- تاریخچه پاساژ دادن: تاریخچه پاساژ دادن هر کشت، از جمله تاریخ هر پاساژ و محیط کشت مورد استفاده را پیگیری کنید.
- محل نگهداری: مکان تمام استوک‌های منجمد را ثبت کنید.
- وقایع آلودگی: هرگونه رویداد آلودگی و اقدامات انجام شده برای رفع آن را مستند کنید.
پایگاه‌های داده دیجیتال: از پایگاه‌های داده دیجیتال یا سیستم‌های مدیریت اطلاعات آزمایشگاهی (LIMS) برای مدیریت کارآمد و ایمن اطلاعات کشت استفاده کنید. این امر به اشتراک‌گذاری داده‌ها و همکاری بین آزمایشگاه‌ها کمک می‌کند.
۴. آموزش و تحصیل
آموزش جامعی را برای تمام پرسنل درگیر در نگهداری کشت فراهم کنید. این شامل آموزش تکنیک آسپتیک، کار با کشت، عیب‌یابی و ثبت سوابق است. بر اهمیت پایبندی به پروتکل‌های استاندارد و حفظ سوابق دقیق تأکید کنید.
آموزش مداوم: شرکت در کارگاه‌ها، کنفرانس‌ها و منابع آنلاین را برای به‌روز ماندن در مورد آخرین پیشرفت‌ها در نگهداری کشت و میکروبیولوژی تشویق کنید.
۵. تخصیص منابع
اطمینان حاصل کنید که منابع کافی برای نگهداری کشت در دسترس است. این شامل موارد زیر است:
- تجهیزات: دسترسی به تجهیزات ضروری مانند اتوکلاوها، انکوباتورها، هودهای لامینار و فریزرها را فراهم کنید.
- لوازم: عرضه کافی از محیط‌های استریل، لوازم یکبار مصرف و عوامل محافظ انجماد را حفظ کنید.
- پرسنل: زمان کافی پرسنل را به فعالیت‌های نگهداری کشت اختصاص دهید.
مشارکت‌های جهانی: برای دسترسی به منابع و تخصص‌هایی که ممکن است به راحتی در سطح محلی در دسترس نباشند، به دنبال همکاری با سازمان‌ها یا مؤسسات بین‌المللی باشید.
نتیجه‌گیری
تسلط بر نگهداری کشت باکتری برای تحقیقات قابل اعتماد و تکرارپذیر، کاربردهای صنعتی و آموزش ضروری است. با اجرای تکنیک‌ها، استراتژی‌های عیب‌یابی و بهترین شیوه‌های ذکر شده در این راهنما، پژوهشگران و متخصصان در سراسر جهان می‌توانند زنده‌مانی، خلوص و پایداری طولانی‌مدت کشت‌های باکتریایی خود را تضمین کنند. پایبندی به پروتکل‌های استاندارد، حفظ سوابق دقیق و پرورش فرهنگ کنترل کیفیت، کلید دستیابی به نتایج سازگار و قابل اتکا در زمینه همیشه در حال تحول میکروبیولوژی است.
با پذیرش یک دیدگاه جهانی و تطبیق این دستورالعمل‌ها با منابع و شرایط محلی، ما می‌توانیم به طور جمعی درک خود را از دنیای میکروبی پیش ببریم و از پتانسیل آن به نفع بشریت بهره‌برداری کنیم.